高级生物化学实验理论与技术

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  • 版 次:31
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  • 印刷时间:2015年06月01日
  • 开 本:16
  • 纸 张:胶版纸
  • 包 装:平装
  • 是否套装:否
  • 国际标准书号ISBN:9787030447302
作者:王燕菲出版社:科学出版社出版时间:2016年01月 
编辑推荐
  《高级生物化学实验理论与技术》可供硕士研究生课程学习使用,也可作为博士研究生、青年科研工作者和医学生们参考资料。 
内容简介
  《高级生物化学实验理论与技术》理论部分共有六章,第一章是蛋白质分离纯化的基本原理和方法,主要介绍蛋白质的粗分和层析纯化。第二章是电泳,主要介绍常用的电泳方法。第三章是荧光免疫,主要介绍荧光标记和抗原抗体反应。第四章是蛋白质组学,介绍蛋白质组学的产生和发展,研究内容以及一些新进展和应用。第五章是基因芯片,主要介绍基因芯片的原理,制备和应用。第六章是酶促反应动力学,重点介绍底物和抑制剂对酶促反应的影响,相关的计算及各种作图法。实验部分的内容包括蛋白分离技术、电泳及蛋白质印迹技术、酶活性测定、K及IC的测定、等电聚焦、双向电泳、小鼠原代细胞培养及染色等八个实验。其中层析和电泳是重点要求掌握的实验,其他实验可选择开设。
目  录
目录
第一篇实验理论
第一章蛋白质分离纯化的基本原理和方法(1)
第一节材料的选择与处理(1)
第二节纯化方案的设计与评价(2)
第三节纯化方法(4)
第二章蛋白质电泳的基本原理和方法(24)
第一节概述(24)
第二节聚丙烯酰胺凝胶电泳(29)
第三节SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(38)
第四节等电聚焦(40)
第五节毛细管电泳(44)
第六节印迹法(转移电泳)(47)
第三章免疫荧光(50)
在线试读部分章节
  第一篇实验理论
  第一章蛋白质分离纯化的基本原理和方法
  随着人类基因组的30亿碱基对测序工作的完成,生命科学研究已进入后基因组时代,研究的焦点将从基因的序列转移到功能方面?为鉴定大量未知蛋白质(酶)的结构和功能,蛋白质研究也将进入一个空前活跃的时期?蛋白质的结构与核酸相比更具有奇妙独特的复杂性和艺术性,它是由20个不同性质的氨基酸交互排列而成,不仅潜在的数量多,而且相互间差异大?致使蛋白质的分离?纯化和鉴定有较大的难度和特殊性?其次,蛋白质和核酸类物质通常是与自然界存在的诸多不同化合物结合在一起,或者是不同蛋白质?不同核酸白身相互组合在一起出现的,加之它们稳定性较差?含量相对偏低,这使提取分离过程变得更加困难?艰巨?另外提取生物大分子物质的材料五花八门?千变万化,所用的方法通用性较差,尤其是提取分离蛋白质的方法更是如此,这也给制备工作带来了麻烦和困惑?尽管如此错综复杂,却也不是无轨迹可寻?因此,本章将以蛋白质为主线讨论其制备的共有特质和一般过程,其中包括材料的选择与处理?测定方法的确立?有效成分的抽提?粗品的纯化和纯品的鉴定等相关步骤?
  第一节材料的选择与处理
  一?材料选择
  在进行材料的选择时,常会提及有效成分一词?所谓有效成分是指欲纯化的某种单一的生命大分子物质?而有效成分以外的其他物质则统称杂质?在动物?植物和微生物材料中,有效成分的含量一般较少,如胰脏中胰岛素的含量小于其鲜重的百万分之一?此外,有效成分稳定性较差,大多数对酸?碱?高温和高浓度有机溶剂等因子较敏感,而且容易被微生物分解变质?因此,提取有效成分的成功与否,首先与选用的材料关系密切?选用的材料如果不同,有效成分的含量就不一样;选用的材料即使相同,但是部位?生长期?生长地区或存放时间不同,有效成分的含量也不尽相同?总的来说,材料选择应遵循的原则是:有效成分含量多?稳定性好;来源丰富?保持新鲜;提取容易?工艺简单;杂质有综合利用价值等?例如,上面提到的胰岛素,从含量看,牛胰脏中比猪胰脏中高,但从我国实际出发,全国猪的饲养头数远比牛多,加之牛可拉车?耕田,因此制备胰岛素一般不选用牛胰脏而选用猪胰脏作材料?又例如磷酸单酯酶,就含量而言,虽然在胰脏?肝脏和脾脏中较丰富,但是因其与磷酸二酯酶共存,进行提纯时,这两种酶很难分开,所以实践中常选用含磷酸单酯酶少?几乎不含磷酸二酯酶的前列腺作材料?
  二?材料处理

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